KLASIFIKASI BAKTERI SECARA NUMERIK

LAPORAN PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI UMUM

KLASIFIKASI BAKTERI SECARA NUMERIK

BERDASARKAN FENOTIP

oleh:

FARIDATUL MAGHFIROH

(0810910007)

KELOMPOK 2

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2010

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Identifikasi dan klasifikasi bakteri yang belum dikenal dari suatu spesimen, hal utama yang harus dilakukan adalah dengan memperoleh biakan murni dari masing-masing organisme sebelum dilakukan berbagai langkah dalam pengidentifikasian untuk klasifikasi. Dalam mengidentifikasi bakteri meskipun tidak ada skema klasifikasi yang diakui secara resmi atau secara internasional, skema klasifikasi yang paling terkenal dan paling umum digunakan adalah yang dipaparkan dalam Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, dan identifikasi dapat juga dilakukan dengan penggunaan kunci komprehensif Skerman (Boone dan Castenholz, 2001). Oleh sebab itu praktikum ini penting untuk dilaksanakan, karena bentuk klasifikasi yang dilakukan dalam praktikum ini akan memberikan suatu bekal yang nantinya akan berguna sebagai suatu penunjang ilmu mikrobiologi selanjutnya, ataupun dalam bidang biologi konservasi.

1.2 Perumusan Masalah

Rumusan masalah pada praktikum ini adalah bagaimanakah hubungan similaritas antar individu? Apakah dapat diketahui hubungan similaritas pada masing-masing organisme dengan klasifikasi bakteri secara numerik berdasarkan fenotip?

1.2 Tujuan

Tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui similaritas dari masing-masing organisme berdasarkan klasifikasi bakteri secara numerik berdasarkan fenotip.

1.4 Manfaat

Manfaat yang dapat diperoleh dari praktikum ini adalah praktikan dapat memahami hubungan similaritas antara organisme yang diidentifikasi dan mengetahui pemanfaatan metode numerik berdasarkan fenotip dalam pengklasifikasian organisme. Sehingga hal ini nantinya akan berguna sebagai suatu penunjang ilmu mikrobiologi selanjutnya, ataupun dalam bidang biologi konservasi.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Klasifikasi dan identifikasi adalah dua hal yang memiliki perbedaan, namun pada dasarnya saling berhubungan dalam taksonomi. Klasifikasi dapat diidentifikasikan sebagai penyusunan suatu organisme kedalam suatu kelompok taksonomi (taksa) berdasarkan persamaan atau hubungan. Klasifikasi organisme prokariota seperti bakteri memerlukan pengetahuan yang didapat dari pengalaman dan juga teknik observasi, sifat biokimia, fisiologi, genetik dan morfologi yang penting untuk menggambarkan sebuah takson. Mikroorganisme merupakan suatu kelompok organisme yang tidak dapat dilihat dengan menggunakan mata telanjang, sehingga diperlukan alat bantu untuk dapat melihatnya, misalnya mikroskop, lup, dan lain-lain. Mikroorganisme memiliki cakupan yang sangat luas,dan terdiri dari berbagai kelompok dan jenis, sehingga diperlukan suatu cara pengelompokan atau pengklasifikasian (Sembiring, 2003).

Klasifikasi dan identifikasi mikroorganisme haruslah diketahui terlebih dahulu karakteristik atau ciri-ciri mikroorganisme. Oleh karena ukurannya yang sangat kecil, tidaklah mungkin untuk mempelajari 1 mikroorganisme saja, sehingga yang dipelajari adalah karakteristik suatu biakan yang merupakan populasi dari suatu mikroorganisme (Loy, 1994).

Taksonomi merupakan suatu langkah dalam pengelompokan jasad hidup di dalam kelompok atau takson yang sesuai. Pertama kali, pengelompokan ini hanya dilakukan dalam lingkungan tumbuh-tumbuhan dan hewan, namun ternyata bahwa untuk mikroba pun dapat digunakan. Dari segi mikrobiologi sendiri, dunia mikroba terbagi menjadi dua kelompok besar, dimana pembagian ini berdasarkan kepada ada tidaknya inti, baik yang sudah terdiferensiasi ataupun yang belum, yaitu: penyusunan urutan DNA telah menjadi prosedur rutin di laboratorium dan perbandingan susunan DNA diantara beragam gen yang mana dapat menggambarkan hubungan perbedaan susunan DNA diantara gen-gen yang tersebar secara cepat, sehingga dapat digunakan untuk menentukan hubungan kekerabatan untuk masing-masing individu (Felsenstein, 1981; Nei dan Kumar, 2000).

Tabel 1. Contoh Tingkat Taksonomi

Tingkatan Resmi	Contoh
Kingdom	Prokaryotae
Divisi	Gracilicutes
Klas	Scotobacteria
Ordo	Eubacteriales
Famili	Entobacteriaceae
Genus	Escherichia
spesies	Coli

Taksonomi dapat dilakukan secara numerik ataupun secara fenetik, dimana taksonomi secara numerik (numerical taxonomy), adalah taksonomi yang dikelompokkan berdasarkan pada informasi sifat suatu organisme yang dikonversikan ke dalam bentuk yang sesuai untuk analisis numerik dan dibandingkan menggunakan komputer, ada atau tidaknya sekurang-kurangnya 50 (sebaiknya beberapa ratus) karakater yang dapat dibandingkan; karakter tersebut di antaranya adalah karakter morfologi, biokimiawi, dan fisiologi, dan koefisien asosiasi ditentukan di antara karakter-karakter yang dimiliki oleh dua atau lebih organisme. Sedangkan taksonomi secara fenetik (phenetic systems) adalah taksonomi yang dikelompokkan berdasarkan pada kesamaan secara keseluruhan, seringkali berupa suatu sistem alami yang didasarkan atas kesamaan karakter, dan tidak tergantung pada analisis filogenetik, koefisien Jaccard (Jaccard coefficient) akan mengabaikan karakter-karakter yang tidak ada pada kedua organisme, nilai-nilai tersebut diatur untuk membentuk matriks kesamaan (similarity matrix), dimana organisme dengan kesamaan tinggi dikelompokkan bersama dalam fenon (phenons), perbedaan (significance) fenon tidak selalu jelas terlihat, namun fenon dengan kesamaan 80% seringkali dianggap satu spesies (bakteri) (Felsenstein, 2004).

Menurut Boone & Castenholz (2001) taksonomi numerik merupakan pengelompokkan suatu unit taksonomi dengan metode numerik ke dalam taksa tertentu berdasarkan atas karakter yang dimiliki, dimana taksonomi numerik memiliki tujuan utama yaitu untuk menghasilkan suatu klasifikasi yang bersifat teliti, reprodusibel serta padat informasi. Taksonomi numerik juga dikenal sebagai Taksonomi Adansonian. Taksonomi numerik ini berdasarkan atas lima prinsip utama, yaitu taksonomi yang ideal yang merupakan taksonomi yang mengandung informasi terbesar, dimana masing-masing karakter diberi nilai yang setara dalam mengkonstruksikan takson yang bersifat alami, tingkat kedekatan antara dua strain merupakan fungsi proporsi similaritas sifat yang dimiliki bersama, taksa yang berbeda dibentuk berdasarkan atas sifat yang dimiliki, dan similaritas tidak bersifat filogenetis melainkan bersifat fenetis (Boone & Castenholz, 2001).

Taksonomi numerik diawali dengan analisis karakter yang diuji dengan berbagai uji, antara lain: uji morfologi, fisiologi dan sifat biokimiawi yang menghasilkan data fenotip yang beragam, data fenotip yang didapat, akan diolah lebih lanjut sehingga menghasilkan koefisien similaritas, yaitu sebuah fungsi yang mengukur tingkat kemiripan yang dimiliki oleh dua atau lebih stain mikroba yang dibandingkan, yang diperoleh dari karakter yang dibandingkan antar dua atau lebih strain mikroba. Koefisien ini terdiri atas dua jenis yaitu, Simple Matching Coeficient (Ssm) dan Jaccard Coeficient (SJ). Ssm merupakan koefisien similaritas yang umum digunakan pada ilmu bakteriologi untuk mengukur proporsi karakter yang sesuai, baik hubungannya bersifat ada (positif) maupun tidak ada (negatif). Sedangkan SJ dihitung, tanpa memperhitungkan karakter yang tidak dimiliki oleh kedua organisme tersebut (Edwards, dan Cavalli, 1964).

Taksonomi fenetik merupakan suatu sistem klasifikasi mikroba tanpa mempertimbangkan sifat evolusioner. Pengukuran kekerabatan berdasarkan sifat fenotip dan genotip, misalnya penentuan sifat biokimia, morfologi, fisiologi, kimiawi dan pembedaan DNA. Aplikasinya dalam kontruksi klasifikasi biologis memungkinkan terwujudnya sirkumskripsi takson berdasarkan prinsip yang objektif, bukan klasifikasi yang bersifat subjektif. Salah satu cara yang paling mudah dalam membandingkan Operational Taxonomical Unit (OTU) adalah dengan mencari jumlah karakter yang identik diantara masing-masing individu yang disebut sebagai koefisien asosiasi (Stanier, dkk., 1982).

Pengklasifikasian bakteri memiliki beberapa kesulitan, kriteria dalam klasifikasi bakteri berbeda dengan mengklasifikasikan tumbuhan tingkat tinggi dan hewan tingkat tinggi yang didasarkan terutama pada sifat-sifat marfologinya. namun hal ini sulit dilaksanakan pada bakteri, sehingga klasifikasi bakteri di dasarkan sebagian pada sifat-sifat morfologi, dan sifat-sifat fisiologinya termasuk imunologi. Pada dasarnya bakteri ketika di bawah mikroskop menunjukkan bentuk morfologi yang sama, namun sifat-sifat fisiologi mereka berlainan antara yang satu dengan yang lain. Ada beberapa golongan bakteri yang sama bentuknya, namun yang satu dapat mencerna asam amino tertentu, sedangkan yang lainnya tidak. Ada pula suatu golongan yang dapat menyebabkan suatu penyakit, sedang golongan yang lain tidak, sehingga dari karakter tersebut bakteri dapat diklasifikasikan berdasarkan sifat-sifat morfologi (Harly, 2005).

BAB III

METODE PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum “Klasifikasi Bakteri Secara Numerik Berdasarkan Fenotip ” dilaksanakan pada tanggal 17 Mei 2010 pukul 12.15 WIB di Laboratorium Mikrobiologi, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang

3.2 Skema Kerja

Langkah awal yang dilakukan dalam praktikum ini adalah data yang telah diperoleh dalam uji fisika ataupun kimia, dikonversikan dalam bentuk angka “1” untuk uji positif“+”, dan “0” untuk uji negatif “-“, yang kemudian dari data tersebut dimasukkan dalam exel, yang kemudian dimasukkan ke dalam notepad, pemasukan ke dalam data diawali dengan jumlah spesies, kemudian jumlah karakter, selanjutnya tanda bintang, yang kemudian masing-masing strain beserta jenis karakter dari masing-masing strain tersebut. Sehingga akan tampil seperti dibawah ini:

04

055

*

"A"=1100101001100010101010001111111111111111001101100010000

"B"=1001101001100100101010010111111111111111001110100000001

"C"=1100100101001100101010100000111000000111001111000000100

"D"=1000010101100110101010000111111000111000001010100001000

Data yang telah dimasukkan dalam notepad, kemudian disimpan dan dimasukkan dalam program clad 97 dengan langkah yaitu file dipilih dan kemudian dipilih open, kemudian dipilih data yang akan dimasukkan, kemudian dipilih phenetic, selanjutnya dipilih augen, full automatic, dan diprint screen untuk dipindahkan ke microsoft word.

BAB IV

PEMBAHASAN

Berdasarkan data hasil praktikum didapatkan out put sebagai berikut:

Data yang didapatkan adalah menggunakan data numerik, sehingga diperoleh Cladogram seperti yang ada diatas. Cladogram tersebut menyatakan bahwasanya strain A dan B memiliki HTU (Hipotetic Taxon Unit) 0,818182, dimana hal ini menyatakan bahwasanya hubungan kekerabatan atau matriks similaritas yang dimiliki oleh strain A dan strain B adalah sebesar 0,818182, sedangkan strain A, B, dan strain D memiliki HTU (Hipotetic Taxon Unit) 0,690909, dimana hal ini menyatakan bahwasanya hubungan kekerabatan atau matriks similaritas yang dimiliki oleh strain A, B, dan strain D adalah 0,690909. HTU (Hipotetic Taxon Unit) antara strain A, B, C, dan strain D adalah 0,618182, dimana hal ini menyatakan bahwasanya hubungan kekerabatan atau matriks similaritas yang dimiliki oleh strain A, B, C, dan strain D adalah 0,618182.

Keempat strain tersebut tidak dapat dikatakan dalam satu genus, spesies, ataupun satu strain karena indeks similaritas yang didapatkan tidak memenuhi kriteria yang pada umumnya ditetapkan, dan pada dasarnya, strain-strain tersebut juga memiliki karakteristik-karakteristik yang berbeda antara yang satu dengan yang lain. Dapat dikatakan satu genus apabila memiliki indeks similaritas antara 89-99 %, dapat dikatakan satu spesies apabila memiliki indeks similaritas 99 %, dan dapat dikatakan satu strain apabila memiliki indeks similaritas 100 %. Menurut Priest dan Austin (1993) bahwasanya matriks kesamaan (similarity matrix), adalah suatu hal dimana organisme dengan kesamaan tinggi dikelompokkan bersama dalam fenon (phenons), perbedaan (significance) fenon tidak selalu jelas terlihat, namun fenon dengan kesamaan 80% seringkali dianggap satu spesies (bakteri) (Priest dan Austin, 1993).

Mekanisme pembuatan pohon cladistic adalah diawali dengan data yang telah diperoleh dalam uji fisika ataupun kimia, dikonversikan dalam bentuk angka “1” untuk uji positif“+”, dan “0” untuk uji negatif “-“, yang kemudian dari data tersebut dimasukkan dalam exel, yang kemudian dimasukkan ke dalam notepad, pemasukan ke dalam data diawali dengan jumlah spesies, kemudian jumlah karakter, selanjutnya tanda bintang, yang kemudian masing-masing strain beserta jenis karakter dari masing-masing strain tersebut. Sehingga akan tampil seperti dibawah ini:

04

055

*

"A"=1100101001100010101010001111111111111111001101100010000

"B"=1001101001100100101010010111111111111111001110100000001

"C"=1100100101001100101010100000111000000111001111000000100

"D"=1000010101100110101010000111111000111000001010100001000

Data yang telah dimasukkan dalam notepad, kemudian disimpan dan dimasukkan dalam program clad 97 dengan langkah yaitu file dipilih dan kemudian dipilih open, kemudian dipilih data yang akan dimasukkan, kemudian dipilih phenetic, selanjutnya dipilih augen, full automatic, dan diprint screen untuk dipindahkan ke microsoft word.

Menurut Priest dan Austin (1993) taksonomi numerik diawali dengan analisis karakter yang diuji dengan berbagai uji, antara lain: uji morfologi, fisiologi dan sifat biokimiawi yang menghasilkan data fenotip yang beragam, data fenotip yang didapat, akan diolah lebih lanjut sehingga menghasilkan koefisien similaritas, yaitu sebuah fungsi yang mengukur tingkat kemiripan yang dimiliki oleh dua atau lebih stain mikroba yang dibandingkan, yang diperoleh dari karakter yang dibandingkan antar dua atau lebih strain mikroba (Priest dan Austin, 1993).

Koefisien ini terdiri atas dua jenis yaitu, Simple Matching Coeficient (Ssm) dan Jaccard Coeficient (SJ). Ssm merupakan koefisien similaritas yang umum digunakan pada ilmu bakteriologi untuk mengukur proporsi karakter yang sesuai, baik hubungannya bersifat ada (positif) maupun tidak ada (negatif). Sedangkan SJ dihitung, tanpa memperhitungkan karakter yang tidak dimiliki oleh kedua organisme tersebut (Felsenstein, 1981).

Cladistic analysis ini merupakan suatu analisis yang digunakan dalam klasifikasi suatu organisme berdasarkan pada persamaan anatomi eksternal maupun internal, fungsi fisiologis, genetik, ataupun sejarah evolusinya. Pengelompokkan berdasarkan persamaan anatomi eksternal merupakan salah satu peluang yang mungkin untuk dilakukan analisa, secara terkomputasi dengan image processing, dari suatu bentuk atau ciri binatang yang komplek, dimana dalam image processing hal ini dilakukan dengan menganalisa obyek kompleksitas permasalahan dalam memecahkan persamaan matematika secara analitik, memberikan dorongan terhadap berkembangnya alternatif lain (metode numerik). Perkembangan komputer, baik dalam peningkatan kemampuan perangkat lunak maupun perangkat keras, dapat memberikan optimalisasi dan akurasi yang semakin baik untuk menyelesaikan berbagai permasalahan (Working Group, 2001).

Nilai similaritas memiliki rentang dari 0 sampai 1 atau 0 sampai 100% dan mengindikasikan shared characters. Jarak similaritas diperlakukan sebagai dissimilarity yang merupakan lawan dari similarity. Matriks similaritas merupakan metode untuk menghasilkan pohon kekerabatan / relationship trees. Metode ini didasarkan pada kekerabatan atau similaritas yang dihitung di antara semua sampel (Priest dan Austin, 1993).

Pendekatan dalam pengujian hubungan filogenetik yaitu fenetik dan kladistik. Fenetik juga dikenal dengan taksonomi numerik yang melibatkan penggunaan ukuran yang bervariasi dari kesamaan untuk masing-masing tingkatan spesies, dimana setiap organisme kemudian dibandingkan dengan organisme lainnya untuk seluruh karakter yang diukur dan dihitung jumlah similarity atau dissimilarity. Organisme kemudian dikelompokkan sehingga yang paling mirip akan berkelompok bersama sedangkan yang berbeda akan memiliki hubungan kekerabatan yang jauh. Kelompok taksonomi (fenogram) hasil dari analisis ini tidak menunjukkan hubungan evolusi. Kadistik merupakan cara lain menyatakan hubungan kekerabatan. Asumsi dalam kladistik bahwa anggota kelompok memiliki sejarah evolusi umum. Pengelompokan berdasarkan kladistik harus memiliki karakteristik bahwa semua spesies dengan berbagai nenek moyang umum (common ancestor) dan semua spesies yang berasal dari common ancestor harus diikutkan dalam takson (Priest dan Austin, 1993).

Fenetik merupakan suatu studi klasifikasi berbagai macam organisme berdasarkan kesamaan atau kemiripan morfologi dan sifat lainnya yang bisa diobservasi tidak tergantung pada asal evolusi organisme bersangkutan. Jadi dalam studi ini, lebih ditekankan adanya proses konvergensi evolusi.
Sedangkan kladistik merupakan kebalikan dari fenetik, yaitu merupakan studi yang mengelompokkan makhluk hidup berdasarkan asal evolusinya. Jadi merupakan suatu studi hipotesis akan evolusi suatu organisme. Kladogram adalah gambaran pohon evolusi hasil studi kladistik. Dendrogram merupakan diagram bercabang yang menggambarkan hirarki kategori berdasarkan derajat kesamaan sejumlah karakterisitk dalam taksonomi (Harly, 2005).

Cladogram merupakan diagram yang menunjukkan hubungan leluhur antara taksa, untuk mewakili evolusi pohon kehidupan. Meskipun secara tradisional cladogram seperti itu, sebagian besar dihasilkan berdasarkan karakter morfologi, molekuler sequencing data dan filogenetik komputasi sekarang sangat umum digunakan dalam generasi cladogram. Hasil akhir dari analisis cladistic adalah seperti pohon diagram kekerabatan yang disebut cladogram atau terkadang disebut dendrogram,cladogram ini secara grafis merupakan proses evolusi hipotetis (Edwards, dan Cavalli, 1964).

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Praktikum ini dapat disimpulkan, bahwasanya, pohon cladistic yang diperoleh dapat menentukan hubungan similaritas, dimana strain A dan B memiliki HTU (Hipotetic Taxon Unit) 0,818182, sedangkan strain A, B, dan strain D memiliki HTU (Hipotetic Taxon Unit) 0,690909, dan HTU (Hipotetic Taxon Unit) antara strain A, B, C, dan strain D adalah 0,618182.

5.2 Saran

Saran yang dapat diberikan adalah praktikan hendaknya memahami terlebih dahulu apa yang akan dipraktikumkan, sehingga praktikan dapat mengikuti jalannya praktikum dengan baik, dan praktikan seharusnya lebih teliti dalam memasukkan data, sehingga hasil yang diperoleh akan lebih akurat.

DAFTAR PUSTAKA

Boone, R.D., and R.W. Castenholz. 2001. Bergey’s Manual Of Systematics Bacteriology. 2nd edition. Springer. New York

Edwards, A. W. F. and Cavalli-Sforza, L. L. 1964. Reconstruction of phylogenetic trees. in Phenetic and Phylogenetic Classification. ed. Heywood, V. H. and McNeill.London: Systematics Assoc. Pub No. 6.

Felsenstein, J. 1981. Evolutionary trees from DNA sequences: A maximum likelihood approach. J Mol Evol 17: 368-376

Felsenstein, J. 2004 Inferring Phylogenies. Sunderland, MA: Sinauer Associates.

Harly, J. P. 2005. Laboratory Exorcises in Microbiology sixth Edition. McGraw Hill Companies, inc, 1211, Avence of the Amonical. New York.

Loy, B. W. 1994. Annalisis Mikrobia Di Lahro . PT Raja Grafindo Persada. Jakarta.

Nei, M. and Kumar, S. (2000) Molecular Evolution and Phylogenetics. NY: Oxford University Press. New York

Priest, F & B. Austin. 1993. Modern Bacterial Taxonomy Second Edition. Champman dan Hall. London.

Sembiring, L. 2003. Petunjuk Praktikum Sistematik mikrobia. Laboratorium Mikrobiologi, UGM, Yogyakarta

Stanier, R. Y., Edward, A. A., and Jon, L. I. 1982. Mikrobiologi. UGM. Penerbit PT. Bhintara Karya Aksara.Yogyakarta.

Working Group .2001. Evolution, Science, and Society: Evolutionary biology and the national research agenda. American.

SEMANGAT untuk MIMPI: mimpi itu indah

SEMANGAT untuk MIMPI: mimpi itu indah:

manusia berhak bermimpi
mimpi mampu memberi kita gairah hidup.
mimpi mampu mewarnai hari ini dan nanti.
jangan biarkan mimpi meredup.

tetaplah bersemangat, tak ada yang salah dengan impian kita.
tak ada waktu untuk menyerah, karna menyerah hanya milik pengecut.
selalu ada jalan, selama kita tetap melangkah menuju yang baru.
membiarkan mimpi kita hidup, adalah pilihan terbaik kita.

semangat........................."

by my luphly priend ^^

KOMPONEN DARAH DAN PENGAMATAN KALSIUM OKSALAT

HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Analisa Prosedur
Probandus yang digunakan dalam praktikum “Komponen Darah dan Pengamatan Kalsium Oksalat” adalah mencit (mus musculus), hal ini digunakan karena mencit merupakan hewan yang biasanya digunakan dalam penelitian-penelitian ilmiah, dan juga hewan ini lebih cepat dalam memberikan respon dari perlakuan yang diberikan. Mencit (mus musculus) juga karena demi menjaga suatu keamanan, karena pada umumnya untuk menguji toksisitas biasanya digunakan mencit sebagai hewan uji. Menurut Acker (1971) bahwasanya untuk mempelajari toksisitas dan keamanan biasanya pertama kali dilakukan pada hewan percobaan, terutama tikus dan mencit. Mencit terkadang ditemukan sebagai hewan peliharaan, namun, sebagian besar tikus diperoleh dari peternak hewan laboratorium untuk digunakan dalam penelitian biomedis, pengujian, dan pendidikan. Bahkan, tujuh puluh persen dari semua hewan yang digunakan dalam kegiatan biomedis adalah mencit (Acker, 1971).

Gambar 1. Mencit (mus musculus) (Isroi, 2010).

Bahan yang digunakan dalam pengontrolan komponen darah dan adanya kalsium oksalat adalah dengan bayam yang dikenal mengandung kalsium oksalat, bayam tersebut dihaluskan dan ditambahkan air sebanyak 8 ml, dan distrirer selama 3 menit agar homogen. Kemudian diambil 0,8 ml dengan mikropipet untuk disondekan ke mencit. Namun pengambilan bayam dilakukan dengan menggunakan rumus dibawah ini:

Gram bayam 1 kg BB
(Berat badan) = dosis bayam mg/kg BB
------------------------------x0,1 gram= A
Kandungan zat besi dalam
100 mg bayam
Misalnya berat mencit = B, maka gram bayam untuk per B (gr) adalah sebagai berikut:
Gram bayam untuk per B (gr)= B
---------------------x A
1000

Menurut Bruneton (1999), bahwasanya Kalsium oksalat atau asam oksalat dalam bayam tidak terdapat dalam keadaan bebas, akan tetapi terdapat dalam bentuk senyawa. Kalsium oksalat merupakan asam dikarboksilat yang hanya terdiri dari dua atom C pada masing-masing molekul, sehingga dua gugus karboksilat berada berdampingan, hal ini karena letak gugus karboksilat terletak berdekatan, kalsim oksalat mempunyai konstanta dissosiasi yang lebih besar daripada asam-asam organik lain, dimana besarnya konstanta disosiasi (K1) = 6,24.10 -2 dan K2 = 6,1.10-5). Kalsium oksalat dalam keadaan murni akan berupa senyawa kristal, senyawa ini larut dalam air (8% pada 10o C) dan larut dalam alkohol. kalsium oksalat membentuk garam netral dengan logam alkali (NaK), yang larut dalam air (5-25 %), sementara itu dengan logam dari alkali tanah, termasuk Mg atau dengan logam berat, yang mana mempunyai kelarutan yang sangat kecil dalam air, sehingga dapat disimpulkan bahwasanya kalsium oksalat tidak larut dalam air (Bruneton, 1999).

A. 1. Pengambilan Darah dari Jantung
Fungsi dari mencit (mus musculus) yang dinarkose dengan kloroform adalah agar mencit pinsan, karena fungsi dari kloroform tersebut adalah untuk membius hewan uji. Menurut Chu (1992), bahwasanya kloroform merupakan nama umum dari triklorometana (CHCl3). Kloroform sering digunakan sebagai bahan bius, meskipun pada umumnya digunakan sebagai pelarut non-polar di laboratorium atau industri karena relative tidak reaktif, dimana wujud dari kloroform ini adalah berupa cairan pada suhu ruang, namun mudah menguap. Mekanisme kloroform sebagai bahan bius adalah uap kloroform akan menekan kerja sistem saraf pusat dari pasien, dan juga meningkatkan pergerakan ion kalium melalui beberapa jenis saluran kalium dalam sel saraf (Chu, 1992).
Fungsi dari mencit yang dibedah adalah untuk diambil darah mencit tersebut dari jantung dengan syring bagian runcing dibawah. Fungsi dari penggunaan syringe dengan bagian yang runcing dibawah adalah untuk mendapatkan darah mencit, fungsi dari bagian yang runcing dibawah adalah agar darah langsung masuk ke dalam syringe. Fungsi dari darah yang dimasukkan tabung vakutainer yang ditambahkan dengan K2 EDTA adalah untuk menampung darah, dimana K2 EDTA berfungsi menjaga darah agar tidak terjadi pembekuan darah.

Gambar 2. Syring (Ananto, 2010).
Tabung vakutainer merupakan tabung yang mana didalamnya terdapat zat K2 EDTA 5.4 mg yang mana zat ini merupakan zat koagulan, sehingga tabung ini digunakan sebagai tempat menyimpan darah karena mengandung antikoagulan, sehingga darah yang disimpan tidak mengalami aglutinasi. Peletakan tabung vakutainer diletakkan miring, hal ini dilakukan agar darah yang tidak memenuhi seluruh volume tabung, tidak akan menggumpal. Tabung ini memiliki tekanan udara dalam tabung negatif, lebih rendah dari lingkungan normal. Tabung vakutainer tersedia dalam berbagai ukuran dan warna. Salah satunya adalah tabung dengan tutup berwarna ungu, dimana jenis tabung vakutainer tersebut mengandung EDTA dalam bentuk liquid (Kotrla, 2009).

Gambar 3. Tabung Vacutainer (Kotrla, 2009).

A. 2 Perhitungan Leukosit
Fungsi dari pengambilan darah sebanyak 50 µl dan dimasukkan dalam cawan petri adalah sebagai sampel. Penambahan larutan hayem berfungsi sebagai pengencer darah. Fungsi dari homogenasi adalah agar terjadi homogenasi antara larutan hayem dan darah. Menurut Murbawani (2006), bahwasanya larutan hayem merupakan suatu larutan yang dibuat dari campuran senyawa natrium sulfat (berair kristal) sebanyak 5g, natrium klorida sebanyak 1g, merkuri klorida sebanyak 0,5g dan ditambahkan air hingga volumenya menjadi 200 ml. Larutan tersebut disaring terlebih dahulu sebelum dipakai dalam mengencerkan darah dalam pipet eritrosit, yang kemudian dimasukkan ke dalam kamar hitung haemocytometer . Jumlah sel darah merah dihitung dalam volume tertentu dengan menggunakan faktor konversi. Sebagai larutan pengencer digunakanlah larutan hayem tersebut (Murbawani, 2006).
Fungsi dari penggunaan haemocytometer dalam praktikum ini adalah untuk menghitung dan mengamati jumlah eritrosit, yang tentunya dengan menggunakan mikroskop. Menurut Hadioetomo (1993), bahwasanya haemocytometer dapat digunakan sebagai alat dalam perhitungan jumlah sel. Selain itu, terdapat berbagai macam cara untuk menghitung jumlah sel antara lain, perhitungan dalam cawan (plate count), perhitungan langsung dibawah mikroskop (direct microscopic count), atau perhitungan dengan bantuan alat yang disebut penghitung Coulter (Coulter counter). Metode perhitungan langsung dibawah mikroskop dilakukan dengan sampel diletakkan di dalam suatu ruang hitung (seperti haemocytometer) dan jumlah sel dapat ditentukan langsung dengan bantuan mikroskop (Hadioetomo, 1993).

Gambar 4. Perhitungan sel dengan haemocytometer (Ruf, 2010).

Gambar 5. Penghitungan Jumlah Sel dengan haemositometer (Rapidmethods, 2000).

Metode lain dalam perhitungan sel selain dengan menggunakan haemositometer adalah dengan menggunakan Kamar hitung Fuchs Rosenthal, sehingga lebih teliti karena memiliki volume yang lebih besar. Apabila cairan berupa purulen, menghitung jumlah lekosit metode ini tidak berpengaruh dalam perhitungan, sehingga sebaiknya jika menggunakan metode ini maka hal tersebut hanya dapat dilakukan dengan cairan yang jernih atau yang agak keruh saja. Cairan yang agak keruh, diencerkan dengan pengenceran yang sesuai, dimana pada umumnya bahan pengencer yang digunakan adalah larutan NaCl 0,9 %, dan bukan larutan turk, karena larutan turk dapat menyebabkan terbentuknya pembekuan dalam. Cairan yang berupa transudat umumnya mengandung kurang dari 500 sel/µl. Prinsip kerja perhitungan dengan menggunakan kamar hitung Fuchs Rosenthal adalah jumlah sel lekosit dihitung berdasarkan pengenceran dalam larutan pengencer dan jumlah sel dalam cairan dalam kamar hitung (Rapidmethods, 2000).
Gambar 6. Fuchs Rosenthal (Dynamicaqua, 2010).

A. 3 Perhitungan Leukosit
Fungsi dari pengambilan darah sebanyak 50 µl dan dimasukkan dalam cawan petri adalah sebagai sampel. Penambahan larutan turk berfungsi sebagai pengencer darah. Fungsi dari homogenasi adalah agar terjadi homogenasi antara larutan turk dan darah. Menurut Murbawani (2006), bahwasanya larutan turk merupakan larutan yang digunakan dalam mengencerkan darah dalam pipet leukosit, yang kemudian dimasukkan kedalam kamar hitung haemocytometer . Jumlah sel darah putih dihitung dalam volume tertentu dengan menggunakan faktor konversi (Murbawani, 2006). Haemocytometer dapat digunakan sebagai alat dalam perhitungan jumlah sel. Selain itu, terdapat berbagai macam cara untuk menghitung jumlah sel antara lain, perhitungan dalam cawan (plate count), perhitungan langsung dibawah mikroskop (direct microscopic count), atau perhitungan dengan bantuan alat yang disebut penghitung Coulter (Coulter counter). Metode perhitungan langsung dibawah mikroskop dilakukan dengan sampel diletakkan di dalam suatu ruang hitung (seperti haemocytometer) dan jumlah sel dapat ditentukan langsung dengan bantuan mikroskop (Hadioetomo, 1993).

A. 4 Metode Sahli (Hb)
Fungsi dari pengambilan 5 tetes HCl 0,1 N adalah untuk melisiskan sel yang akan diamati hemoglobinnya. Darah sebanyak 0,02 ml yang ditambahkan pada larutan HCl adalah berfungsi sebagai sampel. Fungsi dari penambahan aquades secara perlahan adalah untuk mengencerkan larutan HCl dan darah. Fungsi dari pengadukan hingga warna menjadi sama dengan standar adalah untuk homogenasi antara HCl dan darah.
Metode sahli merupakan salah satu metode dalam penetapan hemoglobin secara visual, dimana darah diencerkan dengan larutan HCl sehingga hemoglobin akan berubah menjadi hematin asam. Penentuan kadar hemoglobin dilakukan dengan mengencerkan larutan campuran tersebut dengan aquades hingga warnanya sama dengan warna batang gelas standar. Metode sahli pada umumnya tidak dianjurkan karena mempunyai tingkat kesalahan yang relatif besar, alat ini tidak dapat distandarisasi, dan tidak semua jenis hemoglobin dapat ditetapkan sebagai contoh karboksihemoglobin, methemoglobin, dan sulfahemoglobin (Elert, G.H. 2006).
Metode lain yang digunakan dalam penentuan kadar hemoglobin adalah dengan beberapa metode, antara lain: metode oksihemoglobin, atau metode sianmethemoglobin. Metode yang dapat diterima dalam hemoglobinometri klinik adalah oksihemoglobin, dan sianmethemoglobin, dimana keduanya merupakan cara spektrofotometrik. Metode oksihemoglobin hanya mengukur semua hemoglobin yang dapat diubah menjadi oksihemoglobin, sedang karboksihemoglobin dan senyawa hemoglobin yang lain tidak terukur. Metode oksihemoglobin merupakan metode yang paling sederhana dan tercepat dalam fotometri, namun keterandalan tidak dipengaruhi oleh kenaikan bilirubin plasma, sehingga kerugian dari metode ini adalah tidak stabilnya standar oksihemoglobin. Metode sianmethemoglobin memiliki prinsip kerja dimana ferrosianida akan mengubah besi pada Hb dari bentuk ferro ke bentuk ferri menjadi methemoglobin yang kemudian bereaksi dengan KCN membentuk pigmen yang stabil yaitu sianmethemoglobin (Elert, G.H. 2006).

A. 5 Perhitungan Kalsium Oksalat
Dislokasi dilakukan untuk membunuh mencit tanpa merusak organ, dan pembedahan dilakukan untuk pengambilan organ hepar dan ginjal. Hepar dan ginjal dicuci sebanyak 3 kali dalam cawan yang berisi PBS, hal ini untuk membersihkan darah dan lemak yang menempel pada organ. Pengekstrakan hepar dan ginjal digunakan dalam pembuatan preparat, sehingga mudah diamati. Hasil dari ekstrakan tersebut diletakkan pada gelas obyek dan dihomogenasi dengan pangkal spuit. Fungsi dari homogenasi adalah untuk memperoleh ekstrak hepar dan ginjal. Setelah ditutup dengan gelas penutup, preparat tersebut diamati dengan perbesaran 400X. Menurut Axelsen (1983), bahwasanya, PBS merupakan pelarut yang bersifat isotonik dan tidak beracun bagi sel. Penggunaan PBS sebagai pelarut dalam koleksi oosit karena PBS tidak beracun, menjaga stabilitas pH, isotonik terhadap keadaan tubuh hewan, sehingga menjaga kualitas organ hewan. Komposisi PBS (Phosphat Buffer Saline) antara lain adalah NaCl 13,7 mM (8 g), KCl 2,7 mM (0,2 g), Na2HPO4 x 2H2O 8 mM (1,42 g), dan Aquades ad 1000 ml (Axelsen, 1983).

A. Analisa Hasil
Tabel 1. Hasil pengamatan pengaruh pemberian ekstrak bayam terhadap komponen darah
No Dosis Bayam (%gram) ∑ Eritrosit (%gram) ∑ Leukosit Hb (%gram)
1 kontrol 2,01x109 2,4x107 10,2
2 H35 mg/ kg BB 7,9x108 9x106 13,4
3 M35 1,03x1010 4,6x106 21,8
4 H40 1,6x109 1,7x107 16
5 M40 1,35x109 2,8x107 19,6

Keterangan:
• H35 = Bayam hijau dengan dosis 35
• H40 = Bayam hijau dengan dosis 40
• M35 = Bayam merah dengan dosis 35
• M40 = Bayam merah dengan dosis 40
• BB = Berat badan
Berdasarkan hasil pengamatan yang tertera pada tabel tersebut, bahwasanya dengan pemberian ekstrak bayam hijau dengan dosis 35, jumlah eritrosit, leukosit, mengalami penurunan, sedangkan jumlah Hb mengalami peningkatan dari jumlah normalnya yang ditunjukkan dengan mencit kontrol. Pemberian ekstrak bayam hijau 40 menunjukkan adanya penurunan jumlah eritrosit dan leukosit, sedangkan jumlah Hb meningkat jika dibandingkan dengan mencit kontrol.Pemberian ekstrak bayam merah dengan dosis 35 menunjukkan adanya kenaikan pada jumlah eritrosit dan Hb, sedangkan jumlah leukosit menunjukkan penurunan jika dibandingkan dengan kontrol. Pemberian ekstrak bayam merah dengan dosis 40, menunjukkan adanya penurunan pada jumlah eritrosit dan leukosit, sedangkan jumlah Hb mengalami kenaikan, bila dibandingkan dengan mencit kontrol.
Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil dari praktikum yang telah dilakukan beberapa minggu yang lalu adalah, pemberian ekstrak bayam yang berbeda pada setiap mencit, karena faktanya terkadang mencit tidak memakan ekstrak bayam yang disondekan, namun terkadang bekstrak bayam tersebut akan dimuntahkan, hal ini akan berpengaruh besar terhadap tingginya rendahnya kadar besi dalam darah akibat ekstrak bayam yang dikonsumsi secara kontinyu, sehingga hal tersebut akan berpengaruh pada jumlah masing-masing komponen darah yang akan diamati. Faktor lain selain faktor tersebut adalah karena praktikan kurang memahami langkah demi langkah dalam praktikum ini, sehingga tidak menutup kemungkinan bayam yang disondekan tidak sesuai dengan berat badan dari mencit yang akan disonde, dan praktikan juga kurang faham mengenai teknis penyondean yang baik, sehingga hal tersebut adalah pengaruh besar dalam hasil yang diperoleh.
Jumlah sel-sel leukosit normal dalam satuan perliter darah atau per satu mmk darah adalah 4000 - 11000 / mmk, dimana perhitungan jenis leukosit hanya menunjukkan jumlah relatif dari masing-masing jenis sel, sedangkan dalam mendapatkan jumlah absolut dari masing-masing jenis sel maka nilai relatif (%) dikalikan jumlah leukosit total (sel/µl). Jumlah leukosit akan berbeda-beda, hal ini tergantung pada umur, dimana pada anak limfosit lebih banyak dari netrofil segmen, sedangkan pada orang dewasa limfosit lebih sedikit dibandingkan dari netrofil segmen. Jumlah eritrosit normal pada manusia dewasa umumnya mencapai 5.000.000. Konsentrasi sel-sel darah merah dalam darah pada laki-laki normal 4,6-6,2 juta/mm3, sedangkan pada perempuan 4,2-5,4 juta/mm3, dan pada anak-anak 4,5-5,1 juta/mm3 (Elert, G.H. 2006).
Senyawa yang dikandung dalam bayam selain zat besi antara lain adalah vitamin-A, vitamin-C, vitamin-K, dan vitamin-B6, bayam suga mengandung zat aktif seperti amaratin, rutin, spinasterol, hentriakontan, tanin, kalium nitrat, kalsium oksalat, piridoksin, garam fosfat. Zat besi yang berupa Fe2+ (ferro), sehingga apabila Fe2+ apabila terlalu tinggi dalam berpaparan langsung dengan oksigen Fe2+ akan teroksidasi menjadi Fe3+ (ferri), dimana yang dapat dimanfaatkan pada umumnya adalah ferro, sedangkan ferri pada bayam bersifat toxid. Selain itu, bayam juga mengandung zat nitrat (NO3), yang mana jika teroksidasi dengan udara, maka akan menjadi NO2 (Nitrit). Nitrit adalah senyawa yang tidak berwarna, tidak berbau dan bersifat racun bagi tubuh manusia. Efek senyawa yang beracun dapat meracuni tubuh yang ditimbulkan oleh Nitrit, yang mana hal ini bermula dari reaksi oksidasi Nitrit dengan zat besi dalam sel darah merah, tepatnya di dalam Hemoglobin (Hb). Ikatan Nitrit dengan hemoglobin, disebut Methemoglobin, yang mengakibatkan hemoglobin tidak mampu mengikat oksigen. Jika jumlah methemoglobin mencapai lebih dari 15% dari total hemoglobin, maka akan terjadi keadaan yang disebut Sianosis, yaitu suatu keadaan dimana seluruh jaringan tubuh manusia kekurangan oksigen. Bayam merah mengandung zat besi yang tinggi dibandingkan bayam hijau, sehingga berfungsi menambah darah. (Elert, G.H. 2006).
Fungsi darah adalah sebagai media transportasi, dimana darah akan membawa zat-zat makanan dari saluran pencernaan ke jaringan tubuh, membawa oksigen dari paru-paru dan membawa sekresi kelenjar endokrin ke seluruh tubuh serta sebagai pertahanan melawan mikroba. Untuk mengetahui nilai hematologik dari seseorang dapat dilakukan dengan mengetahui jumlah eritrosit, kadar hemoglobin dan nilai hematokritnya, dimana eritrosit pada mammalia mempunyai inti dan berukuran lebih besar, jika dibandingkan dengan unggas. Eritrosit tersusun atas beberapa komponen, antara lain: 60 persen air dan 40 persen konjungsi protein yang membentuk protein dan heme. Jumlah eritrosit akan berbeda-beda antara individu yang satu dengan yang lain, hal ini dikarenakan dipengaruhi oleh bangsa atau jenis, kondisi nutrisi, aktivitas fisik, kondisi tubuh, jenis kelamin, umur, musim, dan temperatur lingkungan. Jumlah eritrosit akan konstan jika pada lingkungan yang relatif normal, karena eritropoesis yang terjadi akan seimbang dengan destruksi eritrosit (Depkes RI, 1996).
Proses eritropoesis dimulai dari sel induk multipotensial, dimana dari beberapa sel induk multipotensial terbentuk sel-sel yang dikenal dengan eritropoesis. Sel induk unipotensial yang membentuk eritrosit termuda yang dapat diidentifikasi secara morfologis dengan menggunakan pewarnaan sitokimia adalah sel proeritroblas. Zat besi yang terkandung dalam tubuh terdiri dari dua bagian, yaitu yang bersifat fungsional dan yang bersifat reserve (simpanan). Zat besi yang fungsional sebagian besar dalam bentuk Hemoglobin (Hb), dan sebagian kecil dalam bentuk myoglobin. Zat besi yang ada dalam bentuk reserve tidak mempunyai fungsi fisiologi selain sebagai buffer yaitu menyediakan zat besi apabila dibutuhkan dalam kompartmen fungsional. Apabila zat besi cukup dalam bentuk simpanan, maka kebutuhan eritropoiesis (pembentukan sel darah merah) dalam sumsum tulang akan selalu terpenuhi, dimana dalam keadaan normal, jumlah zat besi dalam bentuk reserve ini adalah kurang lebih seperempat dari total zat besi yang ada dalam tubuh,yang mana zat besi yang disimpan sebagai reserve ini, berbentuk feritin dan hemosiderin, yang terdapat dalam hati, limpa, dan sumsum tulang (Pudjiadi, 1993).
Hemoglobin merupakan suatu pigmen eritrosit yang terdiri dari protein kompleks terkonjugasi dan mengandung besi. Proteinnya adalah globin, dimana globin merupakan suatu histon, hemoglobin berwarna merah disebabkan oleh adanya suatu heme, yaitu suatu senyawa metalik yang mengandung satu atom besi. Hemoglobin terdapat dalam eritrosit dan merupakan 90 persen dari berat kering eritrosit. Hemoglobin berfungsi sebagai pigmen respirasi darah dan sebagai sistem bufer dalam darah, yang erat kaitannya dengan kemampuan darah membawa oksigen (Pudjiadi, 1993).
Kebutuhan zat besi pada masing-masing individu akan mengalami perbedaan, faktor utama yang membedakan adalah karena umur. Bayi, ataupun anak-anak yang mengalami masa pertumbuhan memerlukan jumlah zat besi yang lebih banyak. Kebutuhan zat besi relatif lebih tinggi pada bayi dan anak dibandingkan pada orang dewasa apabila dihitung berdasarkan per kg berat badan. Bayi yang berumur dibawah 1 tahun, dan anak yang berumur 6 sampai 16 tahun membutuhkan jumlah zat besi sama banyaknya dengan laki – laki dewasa. Tetapi berat badannya dan kebutuhan energi lebih rendah dibandingkan laki – laki dewasa (Depkes RI, 1996).
Penyakit yang berhubungan karena darah misalnya anemia, hemophilia, hipertensi, hipotensi, varises, penyakit kuning pada bayi, sklerosis, miokarditis, thrombus, dan leukemia. Anemia merupakan suatu kondisi di mana tubuh kekurangan darah akibat kurangnya kandungan hemoglobin dalam darah. Akibatnya tubuh akan kekurangan oksigen dan lemas karena pada dasarnya, hemoglobin bertugas mengikat oksigen untuk disebarkan ke seluruh badan. Anemia sering ditemukan pada seseorang yang kekurangan zat besi, selain itu, anemia juga dapat disebabkan oleh beberapa faktor, antara lain faktor sosial ekonomi, pendidikan, status gizi dan pola makan, fasilitas kesehatan, pertumbuhan, daya tahan tubuh serta infeksi. Faktor- faktor tersebut saling berkaitan. Hemofilia merupakan suatu penyakit atau kelainan pada darah yang sukar membeku jika terjadi luka. Hipertensi merupakan kondisi ketika tekanan darah tinggi yang diakibatkan oleh adanya penyempitan pembuluh darah dengan sistolis sekitar 140-200 mmHg serta tekanan diastolisis kurang lebih antara 90-110 mmHg. Hipotensi merupakan kondisi ketika tekanan darah rendah dengan tekanan sistolis di bawah 100 mmHg. Varises merupakan terjadinya pelebaran pada pembuluh vena yang membuat pembuluh dasar membesar dan terlihat secara kasat mata yang umumnya terdapat pada bagian lipatan betis. Penyakit kuning pada bayi merupakan suatu kelainan akibat adanya gangguan kerusakan sel-sel darah oleh aglutinin sang ibu. Sklerosis merupakan kelainan pada pembuluh nadi sistem transportasi yang mengalami pengerasan. Miokarditis merupakan kelainan akibat terjadinya radang pada otot jantung. Trombus merupakan kelainan yang terdapat pada jantung yang mana kelainan ini disebabkan oleh adanya gumpalan di dalam nadi tajuk. Leukimia merupakan penyakit yang mengakibatkan produksi sel darah putih tidak terkontrol pada sistem transportasi (Depkes RI, 1996).
Racun merupakan suatu zat atau senyawa yang mana ketika masuk ke dalam tubuh akan menghambat respons pada sistem biologis sehingga dapat menyebabkan gangguan kesehatan,penyakit, bahkan kematian. Umumnya berbagai bahan kimia yang mempunyai sifat berbahaya atau bersifat racun, telah diketahui. Namun, tidak demikian halnya dengan beberapa jenis hewan dan tumbuhan, termasuk beberapa jenis tanaman pangan yang ternyata dapat mengandung racun alami, walaupun dengan kadar yang sangat rendah, misalnya bayam (Depkes RI, 1996).
Bayam mengandung asam oksalat, asam oksalat dapat mengikat nutrien yang penting bagi tubuh, sehingga konsumsi makanan yang banyak mengandung asam oksalat dalam jumlah besar dapat mengakibatkan defisiensi nutrien, terutama kalsium. Asam oksalat merupakan asam kuat sehingga dapat mengiritasi saluran pencernaan, terutama lambung. Asam oksalat dapat menyebabkan batu ginjal, sehingga konsumsi makanan yang mengandung senyawa tersebut dianjurkan secukupnya (Depkes RI, 1996).
Berdasarkan pengamatan minggu lalu, bahwasanya berat badan mencit yang diberikan perlakuan larutan daun bayam menunjukkan penurunan berat badan, hal tersebut dimungkinkan karena stres yang dialami oleh mencit tersebut akibat perlakuan-perlakuan yang diberikan. Hal ini tidak terbukti dengan literatur, karena Dalimartha (2003), menyatakan bahwasanya, infus daun bayam merah sebanyak 30% per oral dapat meningkatkan berat badan, kadar besi serum, haemoglobin dan hematokrit, dimana peningkatan tersebut tidak berbeda jika dibandingkan dengan kelompok kelinci yang diberi sulfas ferosus, yang mana sebagai pembanding, digunakan air suling (Dalimartha, 2003).
Tabel 2. Perhitungan Kalsium Oksalat
Perlakuan Organ ∑ CaoX Bentuk
Kontrol Hepar 0 -
Ginjal 0 -
35 mg/kg BB Hijau Hepar 1 Rafida
Ginjal 6 Bintang, Prisma, Drusen
40 mg/kg BB merah Hepar 1 Prisma
Ginjal 1 Prisma
35 mg/kg BB merah Hepar 3 Prisma, jarum
Ginjal 0 -
40 mg/kg BB hijau Hepar 0 -
Ginjal 5 Bintang

Berdasarkan data tersebut bentuk kalsium oksalat pada ginjal dan hepar probandus, dapat diketahui bahwasanya kalsium oksalat berbentuk prisma dominan diseluruh organ mencit yang diamati. Kalsium oksalat pada ginjal dengan perlakuan bayam hijau memiliki jumlah kalsium oksalat yang ditemukan lebih banyak jika dibandingkan dengan yang lain. Kalsium oksalat tidak terdapat pada kontrol, dan pada perlakuan 35 mg/kg BB merah dan 40 mg/kg BB hijau. Larutan bayam yang disondekan ke dalam mencit secara oral mengandung zat besi yang tinggi, dan zat besi tersebut dalam tubuh akan diikat oleh kalsium oksalat, sehingga ketika zat besi tinggi akan menyebabkan produksi kalsium oksalat tinggi dan menyebabkan penumpukan kalsium oksalat pada organ-organ filtrasi misalnya ginjal dan hati. Dosis, dapat menyebabkan kefatalan jika tidak dikontrol, yang mana dosis letal umumnya berkisar antara 10 dan 15 gram perkilogram berat badan (Noor, 1992).
Bentuk dan distribusi kristal kalsium oksalat umumnya sama dalam taksa yang sama dan berbeda di antara taksa yang berbeda untuk menunjukkan bahwa kristal-kristal tersebut dapat digunakan sebagai karakter kunci dalam sistematika. Kristal oksalat yang sering dijumpai adalah berbentuk roset seperti pada daun pepaya, bayam, kangkung, singkong, belinjo, ketela ramabat, kelor, katu, kenikir, dan kristal bentuk prisma terdapat pada lembayung dan selada. Kristal kalsium oksalat berbentuk jarum umumnya terdapat pada Sawi putih dan sawi hijau yang tidak mengandung kristal kalsium oksalat. Kerapatan yang paling tinggi ditemukan pada daun pepaya (Webb, 1999).
Kalsium oksalat yang ditemukan di dalam hati menunjukkan adanya zat besi yang berikatan dengan kalsium, sehingga di dalam hati terdapat sel-sel yang merombak sel darah merah yang telah tua yang disebut dengan histiosit. Zat warna empedu terbentuk dari rombakan eritrosit yang telah tua atau rusak akan ditangkap histiosit, yang mana selanjutnya akan dirombak dan haeglobinnya akan dilepas. Jika kadar zat besi dalam tubuh akan meningkat, akan memicu terbentuknya kristal oksalat yang dapat mengakibatkan penyumbatan aliran darah dan terganggunya fungsi hati (Noor, 1992).

Gambar 7. Angka 6 menunjukkan tempat adanya kalsium oksalat (Toiusd, 2010).



PENUTUP
A. Kesimpulan
Kalsium oksalat berpengaruh terhadap jumlah komponen darah. Bayam mengandung zat besi yang tinggi yang mampu meningkatkan kadar hemoglobin, dan mempengaruhi kerja organ filtrasi seperti hepar dan ginjal karena adanya endapan kristal kalsium oksalat. Berdasarkan hasil praktikum, diketahui bahwa kadar eritrosit dan leukosit tidak meningkat, walaupun pemberian perlakuan bayam dilakukansecara kontinue. Kalsium oksalat dapat mengendap di hati dan jantung dalam bentuk kristal oksalat, misalnya berbentuk prisma, bintang, jarum, drusen, dan rafida.

B. Saran
Saran yang dapat diberikan adalah praktikan hendaknya memahami terlebih dahulu apa yang akan dipraktikumkan, sehingga praktikan dapat mengikuti jalannya praktikum dengan baik, dan praktikan juga lebih memahami apa yang telah dipraktikumkan.
 
DAFTAR PUSTAKA
Acker, 1971. Animal Science and Industry. Prentice Hall Eng Leawood Cliffs. New Jersey.
Ananto, T. 2010. http://eprints.undip.ac.id. Diakses tanggal 1 Juni 2010.
Axelsen, N. H. 1983. Handbook of Immunoprecipitation in Gel Techniques. Blackwell Scientific Publications. Australia.
Bruneton, J., 1999. Toxic Plants Dangerous to Humans and Animals. Lavoisier Publishing, Inc., Secaucus, NJ (ISBN 1-898298-62-9)
Chu, S.F., 1992. Recent Progress on Analytical Techniques for Mycotoxins in Feedstuffs. J. Anim. Sci. 70:3950-3963.
Dalimartha, S. 2003. Obat Tradisional Bayam. http://www.pd-persi.co.id. Diakses tanggal 2 Juni. 2010.
Depkes RI (1996) Direktur Jenderal Pembinaan Kesehatan masyarakat, Pedoman Operasional Penangguklangan Anemia Gizi di Indonesia, Jakarta
Dynamicaqua. 2010. http://www.dynamicaqua.com/microscope_files/01200150.jpg. Diakses tanggal 1 Juni 2010.
Elert, G.H. 2006. Human Anatomy and Physiology, Fifth Edition. Addison Wesley and Longman. San Francisco.
Hadioetomo, R.S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Gramedia, Jakarta.
Isroi. 2010. http://www.isroi.wordpres.com. Diakses tanggal 2 Juni 2010.
Kotrla, T. 2009. Vacutainer Blood Collection System. http.//www. CollegeandUniversity.net. Tanggal akses 30 Juni 2010.
Murbawani, E. A. 2006. Anemia Defisiensi Besi, Kekurangan Zat Besi. http://www.suaramerdeka.com. Diakses tanggal 1 Juni 2010.
Noor, Z. 1992. Senyawa Anti Gizi. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi. Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.
Pudjiadi, S. 1993. Ilmu Gizi Klinis, FK UI, Jakarta.
Rapidmethods. 2000. Haemocytometer count (Biocontrol Systems, Inc., Bellevue, WA, USA). http://www.rapidmethods.com/biocontrol2.html. Tanggal akses 15 Mei 2010.
Ruf, 2010. www.ruf.rice.edu. Diakses tanggal 15 Mei 2010.

Webb, M.A. 1999. Cell-Mediated Crystallization of Calcium Oxalate in Plants. Plant Cell